线粒体膜电位Δψm是一个体现细胞健康水平的线粒体功能性参数。线粒体膜电位在细胞凋亡发生时，会受到干扰破坏。这种膜电位变化可以通过荧光探针5,5‘,6,6’-四氯-1,1‘,3,3’-四乙基苯酸盐-咪唑羰基花青素(JC-1) 来检测。在健康细胞中，线粒体膜电位水平高，JC-1进入细胞后容易在线粒体中富集成为多聚体，呈现红色荧光。而在凋亡或疾病细胞中，线粒体膜电位下降，JC-1以单体形式出现，发出绿色荧光。利用JC-1探针荧光信号的变化来检测凋亡细胞中线粒体膜电位的变化是快速简单有效的检测方法，可以用于流式结果分析，荧光显微镜观察和96孔荧光酶标板读数。
Applied BioProbes 公司JC-1线粒体膜电位检测试剂盒提供线粒体检测所需要的必需试剂，产品内附详细说明，可以用来检测全细胞的线粒体完整性分析。

产品特点：

多种线粒体荧光探针可供选择：

JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit

Mitochondrial stains

图1. 使用JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit (A048) 检测Jurkat凋亡细胞中线粒体膜电位的变化。左图为正常Jurkat细胞(对照)流式细胞图，右图为使用10µM camptothecin 诱导4小时后Jurkat细胞流式细胞图。

检测原理：

◆ JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。JC-1染料表现出电势依赖性的积聚在线粒体内。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。因此颜色的变化非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。线粒体的去极化程度也可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

◆ JC-1染料的特点：

∷ 染料用途广：可用来检测各种细胞类型包括单核细胞和神经细胞，以及完整组织和纯化的线粒体；

∷ 染料特异性更高：与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；

∷ 红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；

∷ 检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；

分子结构：

溶解方法与使用浓度：

◆ JC-1溶于DMSO溶液，配制5 mg/ml的母液。-20°C避光冻存，避免反复冻融。

◆ JC-1常用的浓度范围为1-20μg/ml（检测膜电位），对于很多细胞适宜采用的JC-1浓度为10μg/ml。

JC-1染色步骤（仅作参考）

1. 收集≥2×10⁵的细胞，用37℃预热的新鲜完全培养基调整至1ml悬液。制备阳性对照（以去极化药物处理过的细胞）。标本和阳性对照的染色步骤相同；

2. 融化1管JC-1储存液，每1ml细胞悬液中通过边振荡边加的方式加入2.5μL（终浓度：2.5ug/ml）。振荡细胞悬液直至标本形成均一的红紫色。

3. JC-1在水相容易形成聚集体，所以需要边振荡边加。

4. 加入2ml PBS至细胞悬液中，500×g室温离心5分钟，去上清。

5. 使用0.3ml PBS重悬细胞。

6.上机取样，注意获取细胞的速度不要≥250至300细胞/秒。

Mitochondria Stains Selection Guide

线粒体染色指南

参考资料：
细胞凋亡检测方法PDF(点击查看)

细胞凋亡检测方法概览：

DAPI

Hoechst 33342

细胞核荧光探针

eGFP Annexin V and PI Apoptosis Kit

FITC Annexin V and PI Apoptosis Kit

Andy Fluor™ 488 Annexin V and PI Apoptosis Kit

Apoptotic, Necrotic, and Healthy Cells Detection Kit

Annexin V Conjugates

Caspase-3 Z-DEVD-R110 Assay Kit

Caspase-3 Z-DEVD-R110 HTS Assay Kit

LIVE Caspase-3/7 Green Detection Reagent

LIVE Caspase-3/7 Green Apoptosis Assay Kit

JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit

Mitochondrial stains

TUNEL Chromogenic Apoptosis Detection Kit

TUNEL Andy Fluor™ 488 Apoptosis Detection Kit

TUNEL Andy Fluor™ 594 Apoptosis Detection Kit

TUNEL Andy Fluor™ 647 Apoptosis Detection Kit