首页>
耗材
商家描述
包装清单
售后服务
产品评价(0)
产品介绍:
现货供应,极速送货,敬请选购。
订购信息:
转染效率与质粒纯化方法。
QIAGEN Plasmid Kit实验流程。
更多Qiagen产品,请及时咨询我们,电话:15311652008,邮箱:ibio@163.com
现货供应,极速送货,敬请选购。
订购信息:
QIAGEN Plasmid Maxi Kit (10)
10 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers
|
12162 |
|
采用不同方法制备pRSVcat DNA,通过脂质体介导的转染将其导入指定的细胞系内,40小时后测定CAT表达水平,确定转染效率。每个柱形代表4个独立的转录的平均值(2个质粒制备物分别转染2次)。使用QIAGEN Plasmid Kit可获得最高的转染效率。
如下图:QIAGEN Plasmid Kit实验流程。
将中性细菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge内孵育,数秒内即可过滤澄清。然后将澄清的裂解物上样至阴离子交换纯化柱,在适当的低盐和pH条件下,质粒DNA会选择性地结合上去。利用中盐浓度的洗涤液去除RNA、蛋白质、代谢物及其他低分子量杂质,使用高盐缓冲液洗脱超纯的质粒DNA。利用异丙醇沉淀对DNA进行浓缩并脱盐,并通过离心收集。
如下图:
性能
QIAGEN Plasmid Kit利用重力流QIAGEN阴离子交换柱技术高效纯化质粒DNA。产量可达10 mg(Giga)、2.5 mg(Mega)、500 µg(Maxi)、或100 µg(Midi)高拷贝质粒DNA(培养体积取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌株和培养基。)QIAGEN Plasmid Kits纯化的质粒DNA适合多种应用,如:转染(参见Transfection efficiency versus plasmid purification method)、克隆和体外转录。
原理
QIAGEN-tips内独特的阴离子交换树脂专为纯化核酸设计。它独特的分离特性,使纯化的DNA的纯度相当于连续2次CsCl梯度离心得到的DNA纯度。预装的QIAGEN-tips利用重力流原理工作,缩短了纯化质粒的手动操作时间。整套QIAGEN质粒纯化体系避免苯酚、氯仿、溴化乙锭和CsCl等有毒物质,减小对使用者和环境的危害。
操作流程
使用QIAGEN Plasmid Kits,细菌裂解物通过离心澄清。澄清后的裂解物上样到阴离子交换柱,质粒DNA在适当的低盐条件和pH条件下与树脂进行选择性结合。RNA、蛋白质、代谢产物和和其它低分子量杂质用中盐洗涤液去除,用高盐缓冲液洗脱纯质粒DNA(参见QIAGEN Plasmid Kit procedures)。得到的DNA用异丙醇沉淀浓缩和脱盐后,离心收集。
应用
QIAGEN Plasmid Kits纯化质粒DNA适合多种应用,如:
-
转染
- 克隆
-
PCR
-
体外转录
更多Qiagen产品,请及时咨询我们,电话:15311652008,邮箱:ibio@163.com