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EpiTect Bisulfite Kit (48)
48 EpiTect Bisulfite Spin Columns, Reaction Mix, DNA Protect Buffer, Carrier RNA, Buffers
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59104 |
亚硫酸氢盐的完全转化和DNA回收，用于甲基化分析
- 简化的流程，获得快速、可靠的结果
- 胞嘧啶完全转化
- 独特的DNA保护体系，用于高度敏感的分析
- 优化的试验方案可处理FFPE组织样本DNA
- 离心柱和高通量96孔板方式
快速得到实验结果
完整的EpiTect离心和真空过程只需6小时，包括从DNA到待分析的亚硫酸氢盐转化后的高纯DNA。EpiTect 96 Bisulfite操作时间少于7小时。传统的亚硫酸氢盐转化过程需要18个小时，且需要大量的操作(参见快速简单的亚硫酸氢盐转化和Time saving procedure)。EpiTect Bisulfite Kit为成功进行亚硫酸氢盐转化和DNA回收提供所需的全部试剂。
| EpiTect流程 | 传统流程 | |
|---|---|---|
| 反应构建 | 10分钟；预制溶液 | 40分钟；需反应构建 |
| 亚硫酸氢盐转化 | 5小时 | 16小时 |
| 纯化 | 30–45分钟； EpiTect离心柱或孔板 | 120分钟；纯化、脱璜、沉淀和洗涤 |
完全的DNA转化
每个EpiTect Bisulfite Kit可以相同的效率转化低至1 ng到2 µg DNA。全新的实验步骤和优化的缓冲液可回收得到高产量的转化DNA。当通过real-time PCR扩增经转化的DNA时，低CT值的实验结果显示了高效的胞嘧啶转化(参见Complete cytosine conversion)。对转化的DNA的分析显示，EpiTect Bisulfite Kit可转化超过99%的非甲基化的胞嘧啶(参见Highly efficient cytosine conversion)。高转化率确保了高重复性和可靠的下游分析结果。
特殊样本的亚硫酸氢盐转化
从珍稀样本和少量样本（如：福尔马林固定、FFPE石蜡包埋或显微切割组织）中确定甲基化模式，由于DNA的量很少，实验尤其困难。但是这些样本类型是成功鉴定有价值的疾病，预测生物标记物的专门研究对象。 EpiTect Bisulfite Kit 为这些类型的样本提供优化的操作流程，从而解决了难题（参见Methylation detection from FFPE tissue samples）。该试剂盒含有实验所需的全部缓冲液和试剂，只需少量的手动操作。
对于从FFPE样本、细胞、血液及组织中直接进行亚硫酸氢盐转化而无需预先分离DNA，我们推荐使用EpiTect Plus FFPE Bisulfite Kit和EpiTect Plus LyseAll Bisulfite Kit。
防止DNA降解
DNA保护缓冲液采用独特的配方，防止DNA过度降解（在高温、低pH值条件下使用亚硫酸氢盐处理DNA时经常出现严重的DNA降解），并实现有效的DNA变性，从而产生完全转化为胞嘧啶时所需的单链DNA（参见Unique DNA Protect Buffer and pH indicator system）。防止DNA降解的发生可以保证后续大PCR片段的扩增和分析（参见Fast and easy bisulfite conversion）。DNA保护缓冲液含有PH指示剂染料，从而可保证用于胞嘧啶转化的正确的pH条件。有效的完整DNA回收可保证转化后的DNA至少保存12个月而不影响DNA的质量（参见Long-term DNA storage）。
EpiTect Bisulfite操作流程基于QIAGEN简单直接的结合、洗涤和洗脱体系，仅需几个简单的步骤（参见Conversion procedure）。DNA经过热变性和亚硫酸氢盐转化后，被上样到EpiTect离心柱或96孔板上，使用优化的缓冲液和标准化的离心步骤或真空装置，洗去所有的亚硫酸氢钠并洗脱DNA。洗脱的DNA可用于各种下游应用，如：甲基特异性PCR、real-time PCR分析、亚硫酸氢盐转化后测序（bisulfite sequencing）、结合亚硫酸氢盐的限制性内切酶法分析（COBRA）和焦磷酸测序（Pyrosequencing）。
表观遗传学信息对于生物医学研究（尤其是肿瘤学）、干细胞研究以及发育生物学等领域都非常重要。但是分析DNA甲基化的变化目前仍具有挑战性，因为缺乏标准化的方法可从有限的样本中得到可重现性的数据。QIAGEN推出新的表观遗传学解决方案，使样本分析前处理到分析整个过程实现标准化，即从DNA样本收集、稳定和纯化，到亚硫酸氢盐转化和real-time或终点式PCR甲基化分析或测序（参见Standardized workflows in epigenetics）。
经EpiTect Bisulfite Kit转化和纯化的DNA适用于多种下游应用，如：
- 甲基化特异性PCR 、real-time PCR
- 结合亚硫酸氢盐的限制性内切酶法分析（COBRA）
- 测序/焦磷酸测序（Pyrosequencing）/NGS
- 高分辨率熔解
- 甲基化芯片
通过6个独立的EpiTect Bisulfite PCR反应（每个1 μg DNA）进行扩增，使用QIAGEN PCR Cloning Kit进行克隆，对获得的超过900个克隆进行测序。测序的450,000个核苷酸中有超过150,000个从未甲基化的胞嘧啶残基（DNA 1）被转化成尿嘧啶残基（DNA 2）。胞嘧啶转化成尿嘧啶的转化率达99.4–99.8%。展示的序列式总序列中的一小部分。DNA 1：未处理DNA；DNA 2：转化DNA。
完全的胞嘧啶转化。
根据操作指南，使用EpiTect Bisulfite Kit或其他供应商（Supplier E和Supplier Z）的亚硫酸氢盐转化试剂盒转化1 μg基因组DNA。然后，检测每个样本中未转化DNA的量，检测方法是[A]使用HotStarTaq Plus Master Mix Kit进行终点法PCR和[B]使用QuantiTect SYBR® Green PCR Kit进行SYBR®Green法real-time PCR。EpiTect Bisulfite Kit处理的DNA完全被转化，而使用Suppliers E和Z的试剂盒处理的DNA有很大比例的未转化DNA。
独特的DNA Protect Buffer和pH值指示体系。
[A]在亚硫酸氢盐处理DNA时，DNA Protect Buffer可避免DNA片段化，便于单链DNA的形成，确保完全的亚硫酸氢盐转化。[B]DNA Protect Buffer中的pH指示剂使反应混合可视化，确保获得完全胞嘧啶转化所需的正确pH值。
对FFPE组织样本进行甲基化检测。
使用QIAamp DNA Mini Kit从FFPE组织样本中分离DNA，再使用EpiTect Bisulfite Kit按照FFPE组织实验方案转化DNA（1 µg）。从40 μl洗脱液中取1 μl进行[A]终点法PCR和[B]TaqMan探针法real-time PCR。都检测在转化DNA中特异的Glutathione S-Transferase基因。每个应用中，未转化的基因组DNA（对照）未被扩增。
EpiTect Bisulfite Conversion实验方案。
快速、便利的亚硫酸氢盐转化。
使用QIAamp DNA Blood Mini Kit从血液中纯化人类基因组DNA，使用EpiTect Bisulfite Kit转化不同量DNA（1 ng – 1 µg）。使用HotStarTaq Master Mix Kit进行PCR，设计2对引物扩增转化DNA。每个PCR反应取5 µl上样到1.3%琼脂糖凝胶上。使用EpiTect Bisulfite Kit可转化少至1 ng DNA。C: 未处理的基因组DNA（阴性对照）M: 分子量标准。
省时的实验流程。
完整的EpiTect Bisulfite Kit离心或真空操作流程（从DNA到用于分析的纯化亚硫酸氢盐转化DNA）只需不到6小时。传统的亚硫酸氢盐转化流程需要超过18小时，且需要繁琐的实验操作。
表观遗传学研究的标准工作流程。
长期储存的DNA。
使用EpiTect Kits制备的亚硫酸氢盐转化DNA在–20°C下保存36个月，在几个时间段进行扩增。不同DNA量在不同时间点获得的阈值周期值都与新转化DNA（时间点为0）相当。
