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QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (100)

For 100 x 50 µl reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix (1 x 200 µl), 5x QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer (1 x 1 ml), dNTP Mix (1 x 200 µl, 10 mM each), 5x Q-Solution (1 x 2 ml), RNase-Free Water (2 x 1.9 ml)

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用于灵敏、特异性的一步法RT-PCR

快速方便的单管反应
适合各种RNA模板，无需优化反应条件
独特的酶组合，确保反应的高特异性和高灵敏度
经优化的缓冲体系确保了高效的逆转录和扩增过程

QIAGEN One-Step RT-PCR Kit包含Omniscript逆转录酶和Sensiscript逆转录酶的混合物、HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer、dNTP混合液和Q-Solution。Q-Solution是一种新型的辅助剂，有助于实现“困难”模板（如：高GC含量的模板）的高效扩增。简单的单管反应体系构建和优化的试剂盒组分确保了结果成功且灵敏度高。

性能

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit提供方便的规格，可使用RNA模板进行高灵敏度和特异性的RT-PCR。试剂盒中包含优化的组分，可在同一反应混合液中进行逆转录和PCR扩增，完成"一步式"反应。独特的酶组合和专门研发的反应缓冲液确保在一个管中进行高效、高特异性的逆转录和PCR，无需优化（参见Highly specific RT-PCR using low amounts of template 和Efficient detection of viral RNA）。试剂盒提供的新型的、双阳离子PCR缓冲液确保在宽退火温度范围内得到高产量的特异性PCR产物（参见Influence of annealing temperature on specificity）。使用Q-Solution可提高不理想的RT-PCR的表现，这种独特的辅助剂可帮助逆转录并高效扩增具有高GC含量和复杂二级结构的模板（参见RT-PCR of GC-rich template）。

原理

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可对多种RNA模板进行简单、灵敏的一步式RT-PCR。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有为逆转录和PCR反应特别设计的酶。独特组合的Omniscript和Sensiscrip逆转录酶对RNA模板有高度亲和性，确保RNA逆转录的灵敏度达到1 pg到2 µg。逆转录完成后，升温至95°C，15分钟，活化HotStarTaq DNA Polymerase同时使逆转录酶失活。这种方法可减少引物二聚体等非特异性扩增产物的生成，并减少背景的影响，确保RT-PCR的高灵敏度和可重复性。

退火温度范围宽

引物的最佳退火温度取决于碱基对的组成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的浓度和反应的离子环境。QIAGEN PCR Buffers含有K⁺和NH₄⁺，使用该缓冲液可在很宽的温度范围内增加特异性PCR产物的产量（参见Increased specific primer annealing）。其原理是破坏非特异性结合的引物对，提供更加可靠的反应环境，减少繁琐的温度优化过程。相反，如使用仅含K⁺的PCR或一步式RT-PCR缓冲液，PCR最佳退火温度的范围较窄，可靠性较差。

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer专为提高逆转录和PCR扩增的效率而设计。该缓冲液含有新型辅助剂，可防止逆转录酶对PCR扩增的抑制，而这是一步式RT-PCR中常见的问题。该缓冲液确保在较大的温度范围和Mg²⁺浓度范围内，引物与模板特异性结合，可对多种RNA模板进行高效的RT-PCR扩增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，这是可修饰核酸熔解行为的新型辅助剂。Q-Solution可促进高GC含量或含较多二级结构的模板的逆转录和扩增。使用Q-Solution可简化复杂模板RT-PCR的优化过程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有试剂，可进行快速、简便的RT-PCR，用于多种灵敏的应用（见表）。

可靠的一步式RT-PCR结果
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit 组分	特点
HotStarTaq DNA Polymerase	高度特异性产物
Sensiscript and Omniscript Reverse Transcriptases	RNA初始量的范围大 (1 pg–2 µg) 高灵敏度
OneStep RT-PCR Buffer	无需优化反转录酶不会抑制PCR 抑制RNases
Q-Solution	促进GC含量高的模板的扩增

操作流程

使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、简单的进行RT-PCR反应体系构建。无论是何种应用，即无论是病毒检测、分子诊断研究还是基因表达，您只需将所有试剂在一个离心管中混合即可开始PCR扩增（参见OneStep RT-PCR procedure）。反应混合液含有逆转录和PCR反应所需的所有试剂，无需添加其他试剂即可开始反应（参见下表）。

应用

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit适用于RT-PCR分析，包括：

病毒检测
单细胞RT-PCR
基因表达分析

更多信息：
OneStep RT-PCR实验方案。

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可实现快速简单的RT-PCR体系构建。不论是哪种应用领域——病毒检测、分子诊断研究或基因表达分析——只需将所有组分在一个管内混匀并启动热循环仪程序即可。反应混合物包含进行逆转录和PCR所需的所有试剂；反应开始后无需再加入任何试剂。

使用少量模板进行高度特异性的RT-PCR。

使用图示量的HeLa细胞总RNA及α-连环蛋白特异性引物进行一步法RT-PCR，扩增690 bp的产物。所有反应均遵循供应商的说明进行。M：100 bp分子量标准。

高效检测病毒RNA。

对持续感染的Vero细胞中提取的Sendai病毒RNA进行逆转录并扩增336 bp的F-基因mRNA片段。使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit和图示量的病毒基因组拷贝进行反应。M：分子量标准。（数据由德国Martinsried的Max Planck Institute for Biochemistry的H. Rausch提供，数据是巴伐利亚州环境部支持的“安全等级2级和3级的病毒操作的实验控制”计划的一部分。）

退火温度对特异性的影响。

使用指定供应商提供的试剂盒，在一定的退火温度范围内进行一步法RT-PCR。从Hela RNA (箭头) 中逆转录并扩增1289 bp的人RCC1基因片段。M：分子量标准。仅使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit即可实现高特异性扩增，且无需优化。

对富含GC的模板进行RT-PCR。

从HeLa细胞总RNA中逆转录并扩增439 bp的转录因子TAFII100 mRNA片段 (GC含量：75%)。使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit，加入 (+) 或不加 (–) Q-Solution，进行反应。Q-Solution可确保富含GC的模板的特异性扩增。M：分子量标准。

退火时引物结合的特异性增强。

QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K⁺结合到DNA主链上的磷酸基团（P^–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH₄⁺以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。

更多Qiagen产品，请及时咨询我们，电话：15311652008，邮箱：ibio@163.com

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