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一步法无缝克隆试剂盒不依赖于T4连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用重叠片段重组的方法，采用特殊的酶组合可以将任意方法线性化后的载体和与其两端具有16-25bp重叠区域的PCR片段定向重组连接，可以15分钟内实现A末端或者平末端PCR产物片段高效定向无缝克隆至载体的任意位点。
1、15分钟可以将一个50bp-15kb PCR扩增片段（平末端、A末端均可）克隆插入任意载体的任意位置。
2、不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制，可以在任意位点进行克隆。
3、无缝克隆，插入点不会引入不需要的碱基序列。
4、不依赖于连接酶及磷酸酶，高效，准确，克隆阳性率可达95%以上。
