活细胞纯化培养基 Viable Cell Purification Medium LV-PHIK00104 (仅用于科学研究) I 简介 活细胞纯化培养基（LV-PHIK00104）利用生物相容性优异的新型离心介质，利用活细胞对介质的排除性，可高效去除死细胞、细胞碎片等杂质，提高细胞回收效率。同时，本产品具有维持细胞正常渗透压、修复部分受损细胞和为细胞提供营养需求的优点。经测试，本产品可用于多种物种（人、猴、猪、兔子、大鼠、小鼠等）的多种原代细胞的活细胞分离与纯化过程，包括肝细胞、血管内皮细胞、胰岛beta细胞等。 II 细胞分离（以肝细胞为例） 1. 两步胶原酶灌注法灌注肝脏，具体步骤根据实验室的实验条件而定，通常情况灌注液I（含EGTA）灌注10min~30min，37℃预热的灌注溶液II（含胶原酶）灌注15min~30min。 2. 消化终止与细胞分散，利用含血清的培养基终止消化，过70µm细胞筛，得到单细胞悬液。 3. 细胞洗液清洗，4℃，50×g，离心5min，去上清，离心2次。 4. 活力检测：重悬细胞，取少量细胞悬液，用台盼蓝排除法染色计数，细胞活力低于70%，或者未达到预期，可进行活细胞纯化步骤。 5. 细胞悬液离心去上清，4℃，50×g，离心5min。为方便后续纯化，低于1*108细胞总数可用15mL离心管，高于1*108细胞总数可用50mL离心管。 III 纯化步骤 1. 将纯化培养基加入到含有细胞沉淀的离心管中，宽口枪头轻轻重悬细胞，纯化培养基推荐使用量见下表： 细胞总数 纯化培养基体积/mL 1*106~1*107 2~3 1*107~1*108 3~10 1*108~3*108 10~15 >3*108 实际细胞总量/108*15mL计算 2. 沿管壁向离心管小心加入2-5mL肝细胞铺板培养基（其它常规培养基亦可），切勿扰动下层，加入后可见明显分层。 3. 离心1次，4℃，800×g（升速为9，降速为1），离心20min。 4. 取纯化培养基与铺板培养基之间的细胞层，转移到新的离心管中，加入两倍体积的铺板培养基（其它常规培养基亦可），离心1次，4℃，50×g，离心5min。 5. 去上清，加入铺板培养基重悬，取少量细胞悬液，用台盼蓝排除法染色计数； 6. 将肝细胞接种到胶原包被的培养板中，后续步骤遵循常规操作。 IV 特殊说明 宽口枪头：将1mL枪头尖减掉，再灭菌使用，以降低细胞剪切力。 Ⅴ 联系方式 公司电话：0755-28284050 技术支持：19902901483（周博士）