人CD8阳性T细胞

(仅用于科学研究)

人CD8阳性T细胞是从人全血中通过Ficoll分离得到PBMC，再经过美天旎抗CD8磁珠纯化，最后经过抗CD8抗体进行流式分析，细胞纯度不低于90%。

I 试剂与材料

-冻存人CD8阳性T细胞（Cat# LV-CD8+T002）

-培养基（完全RPMI1640，见下表）

-37℃恒温水浴锅

-生物安全柜

-15ml离心管

-37℃/5%二氧化碳培养箱

-宽口滴管和宽口移液枪头

-移液枪

-75%酒精

II 完全RPMI1640培养基

III 细胞的复苏与铺板

1.       完全RPMI1640培养基放入37℃恒温水浴锅中让其充分预热。

2.       将冻存的细胞从冷藏位置迅速转移至37℃恒温水浴

3.       锅中。尽可能多的浸入37℃水中，作规律的水平摇动，但必须确保冻存管盖子保持在水面以上。

4.       解冻冻存管至刚好完全溶解成液体，约90-120秒，。

5.       用75%酒精对冻存管消毒，并将其转移到生物安全柜中。

6.       小心地将解冻后的细胞吸出，移至15ml离心管，并

用培养基润洗一遍冻存管及吸取细胞的枪头。

7.       一边摇晃离心管，一边加入完全RPMI1640培养基至12ml（注意：前3ml要缓慢逐滴加入并摇晃，后面9ml可加快速度），最后上下颠倒混匀。

8.       20℃，500×g，升速7，降速4，离心8min。

9.       弃上清，加入3ml完全RPMI1640培养基重悬细胞，并用台盼蓝染色计数。

10.   重复第7步，用完全RPMI1640培养基重悬细胞，并按实验要求的密度铺板进行铺板。

11.   在37℃/ 5%二氧化碳培养箱中培养。

Ⅴ 联系方式

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