人脐带间充质干细胞

Human umbilical cord mesenchymal stem cell

（可贴壁，Cat# LV- MSC001）

(仅用于科学研究)

该说明书方法适用于本公司提取的人脐带间充质干细胞，您使用时，请按随货的说明书操作，如有任何疑问可咨询公司技术人员。

I 简介

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells, MSC)，又称间充质基质细胞，是一种自我更新的多能细胞，可分化为多种类型的细胞。MSC已被证明在体外分化成脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、肌细胞、胰岛ß细胞等。它们也可以转化为神经细胞和肝细胞。本产品分离至新鲜足月新生儿脐带，供体信息完整，病人知情同意，符合相关伦理标准。本司对每批间充质干细胞进行严格的质量控制试验。检测细胞形态、增殖潜能、粘附率和活力。此外，根据ISCT采用流式细胞技术测试了对其表征CD73/CD90/CD105和CD14/ CD19/CD34/CD45/HLA-DR等多种标志物。在不使用抗生素和抗真菌药物的培养条件下，对每个批次进行脂肪、成骨等分化试验。此外，所有细胞经检测，无HIV、HBV、HCV以及微生物污染物(真菌、细菌和支原体)。

II  试剂与材料

-人脐带间充质干细胞（Cat# LV- MSC001）

-复苏培养基（Cat#LV-Rec001）

-MSC培养基（Cat#LV-MSCM001）

-碎冰及冰盒

-无菌15ml离心管（冰上预冷）

-一次性移液管

-宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用）

-移液枪

-恒温水浴锅（38℃预热）

-冷冻水平离心机（带水平转子，可离心15ml离心管）

-生物安全柜

-37℃/5%CO₂培养箱

-75%酒精

III 细胞的复苏与铺板

1.        将15ml离心管插入盛有足量碎冰的冰盒中，紫外消毒15min；预冷离心机。

2.        复苏培养基放碎冰中充分预冷，铺板培养基放入38℃恒温水浴锅中充分预热。

3.        将冻存的细胞从冷藏位置迅速转移至38℃恒温水浴锅中，尽可能多的浸入38℃水中，顺时针水平摇动，但必须确保冻存

管管盖保持在水面以上。

4.        解冻冻存管约90-120s，至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。

5.        用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。

6.        用宽口枪头将细胞重悬（轻轻吹打2次），并转移至预冷的15ml离心管中（注意：冻存管与枪头上残留细胞，可用1ml复苏培养基清洗冻存管与枪头）。

7.        向细胞悬液逐滴加入预冷复苏培养基，每1ml细胞悬液加入10ml复苏培养基（注意：前3ml要缓慢逐滴加入并轻微摇晃，后面7ml可加快速度），最后轻微上下颠倒1次混匀。

8.        250×g，4°C离心5min，去上清并用培养基重悬。

9.        沉淀的细胞用MSC培养基重悬并定容至4ml，用台盼蓝排除法测定细胞的活力和细胞总量。

10.     将细胞接种至培养皿中（推荐密度：5×10³cells/cm²），摇匀，在37℃/5% CO₂培养箱中培养，24h后换液。

IV 细胞培养与传代

1.          细胞融合度达到80%（一般3天）时可进行传代。

2.          提前将培养基、PBS、胰酶放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后放入超净台内。

3.          吸除旧培养液，加少量PBS润洗细胞，按0.25%胰酶：PBS =1：1加入适量胰酶，使加入的量能盖住细胞，37℃孵育，约2~3min显微镜下观察。

4.          待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液（控制吹打的力度，避免产生大量的气泡）。

5.          250×g，室温离心5min，去上清并用MSC培养基重悬。将细胞悬液按推荐密度接种到新的细胞瓶内，置37℃/5%CO₂培养箱中培养，隔天观察贴壁生长情况。

V 关于售后

如您发现有产品任何质量问题，请您收集原始数据，请第一时间联系公司销售或者技术支持，公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同，操作人员习惯不同，熟练程度不一样，实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限，公司不做售后，请老师理解与支持。

售后有效期与提供的原始数据：

复苏问题：复苏24小时以内；提供台盼蓝染色或者PI染色。

污染问题：复苏96小时以内；提供相差显微镜照片。

纯度问题：一个月内；提供免疫荧光或者流式结果。

VI 联系电话

公司电话：0755-28284050

技术支持：19902901483（周博士）