细胞描述：

1964年，HT-29细胞系由J.Fogh用移植培养方法和含15%FBS的F12培养液从原发性肿瘤分离。近来，已建株的培养细胞用含血清McCoy’s 5A培液培养。该细胞系在裸鼠中致瘤，也能在类固醇处理的地鼠中致瘤。

细胞特性：

1） 来源：结肠癌

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10⁶  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。      

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备McCOY's 5A培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%.

注意事项：HT-29复苏后第一周可能会有大量漂浮细胞，可更换新鲜培养液，同时将漂浮的细胞离心收集后加回到培养瓶中与贴壁细胞共同培养。新复苏的细胞会以补丁形态三维接触生长（即不是单层扁平生长），待细胞分裂生长后将会变回上皮细胞形态单层扁平生长。

2) 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。