产品概述 产品描述 AapCas12b 核酸酶(又名 C2c1)是由 tracrRNA-crRNA(或 sgRNA)介导的 DNA 核酸内切酶，在靶标双链 DNA 存在 PAM (TTN) 序列的情况下，特异地剪切靶标双链 DNA，使 DNA 双链断裂并生成粘性末端。而 AapCas12b 特异地剪切单链 DNA 靶标不依赖 PAM 序列。此外，双链或单链 DNA 靶标均能激活 AapCas12b 的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，即当 AapCas12b 酶与 sgRNA、靶标 DNA 结合形成三元 复合物后，便会被激活针对非特异序列 ssDNA 的反式剪切活性，将体系中的任意序列 ssDNA 切碎。 AapCas12b 来源于嗜酸耐热菌 Alicyclobacillus acidiphilus，最佳剪切反应温度为 60℃，因此更适用于与 LAMP 联用，开发“一步法”恒温扩增/CRISPR-Cas 检测体系。 本产品将无甘油 AapCas12b 核酸酶冻干，可用于常温运输及保存，使用配套的冻干 Cas 酶复溶液复溶 后，具有与本公司非冻干型 AapCas12b (C2c1) Nuclease（#32118）同等的反应活性。本产品包括可用于单 个反应的酶冻干粉及冻干球等多种冻干形态，满足不同下游反应体系构建的需求。 产品组分 组分 V32118S-01 V32118S-02 AapCas12b Lyophilized Beads(PENICILLIN VIALS) 48 T 96 T · 单个反应的冻干球中AapCas12b含量为5 pmol，建议用于20 μL CRISPR反应体系； 保存条件 本产品常温保存及运输；复溶后于-20℃储存，避免反复冻融。 实验流程 1.冰上制备如下除Cas酶外的CRISPR反式剪切反应体系 mix： 组分 体积 终浓度 10 × HOLMES Buffer 1（#32005） 2 μL 1 × 10 μM sgRNA 0.5 μL 250 μM 1 μM Target DNA 0.5 ~ 5 μL 25 ~ 250 μM 10 μM HOLMES ssDNA Reporter（#31101） 0.5 μL 250 μM Nuclease-free Water Up to 20 μL 2.将上述 mix 20 μL混匀后加入单个反应体系的冻干球，使之溶解。 3.立即放入实时荧光定量 PCR仪检测荧光信号，60℃反应，每 30 sec采集一次荧光信号。