二氨基联苯胺（Diaminobenzidine,DAB）是过氧化物酶（POD）的显色底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP标记的免疫印记或免疫组化反应。过氧化物酶催化底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。免疫印记可直接在膜上显示条带；免疫组化标本显色时间一般为室温5-20分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。

http://www.solarbio.com/goods-1212.html DAB显色试剂盒（20×）说明书

规格：            DA1010-3      DA1010-10 

       溶液 A:       3ml           10ml 

       溶液 B：      3ml           10ml 

保存： 

   -20 ℃避光密闭保存，一年有效。避免反复冻融。短期可 2-8℃保存。

产品简介： 

   二氨基联苯胺（Diaminobenzidine,DAB ）是过氧化物酶（POD ）的底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP 标记的免疫印记或免疫组化反应。过氧化物酶使底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。免疫印记可直接在膜上显示条带。免疫组化标本显色时间一般为室温 5-20 分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。 

操作说明： 

1.   对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP ）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5 次，每次 3-5 分钟。 

2.   取900ul PBS（或双蒸水），加入50ul 溶液A，50ul 溶液B 混合均匀，即配成 DAB工作液。 

   如需要更大体积工作液，可按比例放大。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，1 小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。 

3.   向组织切片或膜上加入适量 DAB工作液，确保能充分覆盖样品。  

4.   室温避光孵育 3-10 分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。  

5.   去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤 2-3 次即可终止显色反应。  

6.   对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。对于膜，显色反应终止后，可以

室温晾干避光保存。 

注意事项： 

1 ．DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用； 

2 ．显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用； 

3 ．显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在； 

4 ．DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h 后使用。