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该试剂盒采用双抗夹心酶联免疫吸附法原理。酶标板预包被亲和纯化的抗小鼠TNF-α的抗体。将含有小鼠TNF-α 的样品或标准品加入到酶标板中，与包被抗体反应。再加入生物素标记的检测抗体，并与酶标板上捕获的小鼠TNF-α结合。接着，加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）以形成固相抗体-小鼠TNF-α-生物素标记抗体-SA-HRP的夹心复合物。然后，将 TMB 溶液加入孔中并进行孵育，酶促反应产生蓝色物质，加入终止液后，变成黄色。在450nm 波长下测定吸光值。最后通过建立标准曲线，根据 OD 值来计算样品中小鼠TNF-α的浓度。
